Mitochondriální FoF1-ATP syntéza generuje ATP v procesu oxidativní fosforylace (OXPHOS). Dimery, které vytváří, jsou důležitými faktory pro utváření mitochondriálních krist. Důležitost tohoto komplexu pro oba procesy, formování mitochondriální struktury a OXPHOS, ztěžuje určení specifického účinku ztráty dimerů. V této práci jsem využila krevní formu savčího parazita Trypanosoma brucei, který k tvorbě ATP nevyužívá OXPHOS, za účelem zkoumání důležitosti dimerů ATP syntázy v mitochondriální biogenezi. Vytvořila jsem double knock-out buněčné linie, u nichž ztráta podjednotky g vedla k tomu, že komplex byl přítomen pouze ve formě monomerů. Pomocí PCR reakce jsem ověřila úspěšné vytvoření linií a pomocí nativní elektroforézy jsem ověřila očekávanou ztráta dimerů. Vytvořené buněčné linie budou vynikajícím nástrojem pro studium úlohy dimerů ATP syntázy v krevní formě parazita a také jejich následné diferenciaci do hmyzí formy, která využívá procesu OXPHOS.
Anotace v angličtině
Mitochondrial FoF1-ATP synthase is a molecular machine that generates ATP in a process known as oxidative phosphorylation (OXPHOS). Its dimers are crucial factors for mitochondrial cristae biogenesis. The importance of this complex for both processes, mitochondrial ultrastructure and OXPHOS, makes it difficult to decipher the specific effects of dimer loss. Here, I took advantage of the bloodstream form Trypanosoma brucei, which does not use OXPHOS for ATP generation, to investigate the role of ATP synthase dimers in mitochondrial biogenesis. I generated a knock-out cell line in which the absence of the ATP synthase subunit g results in the complex being present only as a monomer. I have verified the generated mutant cell line by PCR and detected the expected loss of dimers by native electrophoresis. The generated mutant cell line will be an excellent tool to study the role of ATP synthase dimers in bloodstream parasites and their differentiation into OXPHOS-competent insect forms.
Klíčová slova
Trypanosoma brucei, ATP syntáza, dimerizace ATP syntázy, kristy, podjednotka g
Klíčová slova v angličtině
Trypanosoma brucei, ATP synthase, ATP synthase dimerization, cristae, subunit g
Rozsah průvodní práce
55 s.
Jazyk
CZ
Anotace
Mitochondriální FoF1-ATP syntéza generuje ATP v procesu oxidativní fosforylace (OXPHOS). Dimery, které vytváří, jsou důležitými faktory pro utváření mitochondriálních krist. Důležitost tohoto komplexu pro oba procesy, formování mitochondriální struktury a OXPHOS, ztěžuje určení specifického účinku ztráty dimerů. V této práci jsem využila krevní formu savčího parazita Trypanosoma brucei, který k tvorbě ATP nevyužívá OXPHOS, za účelem zkoumání důležitosti dimerů ATP syntázy v mitochondriální biogenezi. Vytvořila jsem double knock-out buněčné linie, u nichž ztráta podjednotky g vedla k tomu, že komplex byl přítomen pouze ve formě monomerů. Pomocí PCR reakce jsem ověřila úspěšné vytvoření linií a pomocí nativní elektroforézy jsem ověřila očekávanou ztráta dimerů. Vytvořené buněčné linie budou vynikajícím nástrojem pro studium úlohy dimerů ATP syntázy v krevní formě parazita a také jejich následné diferenciaci do hmyzí formy, která využívá procesu OXPHOS.
Anotace v angličtině
Mitochondrial FoF1-ATP synthase is a molecular machine that generates ATP in a process known as oxidative phosphorylation (OXPHOS). Its dimers are crucial factors for mitochondrial cristae biogenesis. The importance of this complex for both processes, mitochondrial ultrastructure and OXPHOS, makes it difficult to decipher the specific effects of dimer loss. Here, I took advantage of the bloodstream form Trypanosoma brucei, which does not use OXPHOS for ATP generation, to investigate the role of ATP synthase dimers in mitochondrial biogenesis. I generated a knock-out cell line in which the absence of the ATP synthase subunit g results in the complex being present only as a monomer. I have verified the generated mutant cell line by PCR and detected the expected loss of dimers by native electrophoresis. The generated mutant cell line will be an excellent tool to study the role of ATP synthase dimers in bloodstream parasites and their differentiation into OXPHOS-competent insect forms.
Klíčová slova
Trypanosoma brucei, ATP syntáza, dimerizace ATP syntázy, kristy, podjednotka g
Klíčová slova v angličtině
Trypanosoma brucei, ATP synthase, ATP synthase dimerization, cristae, subunit g
Zásady pro vypracování
-
Zásady pro vypracování
-
Seznam doporučené literatury
-
Seznam doporučené literatury
-
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Obhajoba probíhala prezenčně. Komise zasedla ve jmenovaném složení. Zapisovatelem byla Dr. Langhansová. Dále se obhajoby účastnil 1 host (M. Husová).
Průběh obhajoby:
1. Studentka představila výsledky své práce během 15 minut.
2. Školitelka přečetla svůj posudek a se studentkou byla spokojena.
3. Předseda komise vyzval oponentku Dr. Horákovou k přečtení posudku.
4. Dr. Horáková přečetla posudek včetně komentářů a připomínek a vznesla dotazy:
(Kvantifikace western blotů, morfologie krist, fenotyp dKO linií, tvorba komplexů podjednotek g a e)
5. Studentka zodpověděla dotazy ke spokojenosti oponentky.
6. Diskuze nad dotazy komise (hydrolýza ATP a mitochondriální potenciál, rozmístění ATP v kristách).
6. Komise hlasovala 4x výborně, průměr 1,00, čili konečné hodnocení výborně. Uděleno 140 bodů.