Onemocnění mor včelího plodu, způsobeno původcem Paenibacillus larvae je závažné onemocnění včely medonosné, které je v České republice zakázáno léčit antibiotiky. Při výskytu onemocnění v úlu je ze zákona dané spálení úlu. Rostlinné silice vykazují antimikrobiální aktivitu a jejich použití může přispět s bojem s touto nebezpečnou nemocí.
Cílem bakalářské práce bylo ověření baktericidního účinku vybraných rostlinných silic na původce onemocnění moru včelího plodu P. larvae. Dalším stanoveným cílem bylo stanovení minimální inhibiční a baktericidní koncentrace u vybraných rostlinných silic.
Celkem bylo použito 11 rostlinných silic, které se hodnotily jak samostatně, tak v kombinaci s ostatními rostlinnými silicemi. Vyhodnocení probíhalo na mikrotitračních destičkách pomocí spektrofotometru a na tuhém mediu na Petriho miskách. Nejúčinnější rostlinná silice byla silice česneku kuchyňského (Allium sativum bulb oil), která měla hodnoty minimální i baktericidní koncentrace 32 ?l/mg. Mezi další velmi účinné rostlinné silice řadíme silici skořice (Cinnamomum zeylanicum bark oil). Mezi nejméně účinné řadíme silice mrkve seté (Daucus carota sativa seed oil), tymiánu červeného (Thymus vulgaris flower/leaf oil), dobromyslu (Origanum vulgare) nebo mateřídoušky (Thymus serpyllum oil).
Anotace v angličtině
Americal foulbrood disease, caused by etiological agent Paenibacillus larvae is serious disease which affects honey bee that is prohibited to treat with antibiotic in the Czech Republic. If the disease occurs in hive, it is a legal requirement to burn the hive. Essential oils have antimicrobial aktivity and their use can help fighting this dangerous disease.
The aim of the bachelor thesis was to verify the bactericidal effect of selected essential oils on the causative agent of the americal foulbrood disease P. Larvae. Another stated aim was to determine the minimum inhibitory and bactericidal concentrations of the selected essential oils.
A total of 11 essential oils were used and evaluated both alone and in combination with other essential oils. The evaluation was carried oud on microtiter plates using spectophotometer and on agar medium in petri dishes. The most effective essential oil was garlic oil (Allium sativum bulb oil), which had minimum and bactericidal concentration values of 32 ?l/mg. Other very effective plant essential oils include cinnamon essential oil (Cinnamomum zeylanicum bark oil). The least effective essential oils are carrot oil (Daucus carota sativa seed oil), thyme oils (Thymus serpyllum oil, Thymus vulgaris flower/leaf oil) or oregano oil (Origanum vulgare).
Onemocnění mor včelího plodu, způsobeno původcem Paenibacillus larvae je závažné onemocnění včely medonosné, které je v České republice zakázáno léčit antibiotiky. Při výskytu onemocnění v úlu je ze zákona dané spálení úlu. Rostlinné silice vykazují antimikrobiální aktivitu a jejich použití může přispět s bojem s touto nebezpečnou nemocí.
Cílem bakalářské práce bylo ověření baktericidního účinku vybraných rostlinných silic na původce onemocnění moru včelího plodu P. larvae. Dalším stanoveným cílem bylo stanovení minimální inhibiční a baktericidní koncentrace u vybraných rostlinných silic.
Celkem bylo použito 11 rostlinných silic, které se hodnotily jak samostatně, tak v kombinaci s ostatními rostlinnými silicemi. Vyhodnocení probíhalo na mikrotitračních destičkách pomocí spektrofotometru a na tuhém mediu na Petriho miskách. Nejúčinnější rostlinná silice byla silice česneku kuchyňského (Allium sativum bulb oil), která měla hodnoty minimální i baktericidní koncentrace 32 ?l/mg. Mezi další velmi účinné rostlinné silice řadíme silici skořice (Cinnamomum zeylanicum bark oil). Mezi nejméně účinné řadíme silice mrkve seté (Daucus carota sativa seed oil), tymiánu červeného (Thymus vulgaris flower/leaf oil), dobromyslu (Origanum vulgare) nebo mateřídoušky (Thymus serpyllum oil).
Anotace v angličtině
Americal foulbrood disease, caused by etiological agent Paenibacillus larvae is serious disease which affects honey bee that is prohibited to treat with antibiotic in the Czech Republic. If the disease occurs in hive, it is a legal requirement to burn the hive. Essential oils have antimicrobial aktivity and their use can help fighting this dangerous disease.
The aim of the bachelor thesis was to verify the bactericidal effect of selected essential oils on the causative agent of the americal foulbrood disease P. Larvae. Another stated aim was to determine the minimum inhibitory and bactericidal concentrations of the selected essential oils.
A total of 11 essential oils were used and evaluated both alone and in combination with other essential oils. The evaluation was carried oud on microtiter plates using spectophotometer and on agar medium in petri dishes. The most effective essential oil was garlic oil (Allium sativum bulb oil), which had minimum and bactericidal concentration values of 32 ?l/mg. Other very effective plant essential oils include cinnamon essential oil (Cinnamomum zeylanicum bark oil). The least effective essential oils are carrot oil (Daucus carota sativa seed oil), thyme oils (Thymus serpyllum oil, Thymus vulgaris flower/leaf oil) or oregano oil (Origanum vulgare).
Rešeršní část práce bude zaměřena na problematiku původce onemocnění moru včelího plodu, bakterii Paenibacillus larvae. Konkrétně bude popisovat životní cyklus, patogenezi, virulenci a velký důraz bude kladen na inhibiční účinky různých rostlinných silic a jejich kombinací.
2. Cíl práce
Ověření baktericidního vlivu u vybraných silic
Stanovení minimální inhibiční a baktericidní koncentrace u vybraných rostlinných silic
3. Hyptézy
1. Má kombinace určitých rostlinných silic větší inhibiční koncentraci než silice samotné?
2. Bude kombinace určitých rostlinných silic působí aditivně nebo synergicky?
4. Metodika
Prvotní screening antimikrobiální aktivity rostlinných silic bude proveden difuzní metodou na agarovém živném mediu (Disc diffusion assay). Nejúčinnější silice budou dále hodnoceny mikrodiluční metodou (Broth microdilution method) v tekutém kultivačním mediu na mikrotitračních destičkách. Na základě spektrofotometrického vyhodnocení růstu bakterií bude stanovena minimální inhibiční koncentrace (MIC). K ověření minimální baktericidní koncentrace budou inokula přenesena na agarové půdy.
5. Využití v praxi
Poznatky z této práce budou sloužit jako zdroj informací pro vývoj alternativního přípravku pro kontrolu tohoto včelího onemocnění.
Zásady pro vypracování
1. Současný stav
Rešeršní část práce bude zaměřena na problematiku původce onemocnění moru včelího plodu, bakterii Paenibacillus larvae. Konkrétně bude popisovat životní cyklus, patogenezi, virulenci a velký důraz bude kladen na inhibiční účinky různých rostlinných silic a jejich kombinací.
2. Cíl práce
Ověření baktericidního vlivu u vybraných silic
Stanovení minimální inhibiční a baktericidní koncentrace u vybraných rostlinných silic
3. Hyptézy
1. Má kombinace určitých rostlinných silic větší inhibiční koncentraci než silice samotné?
2. Bude kombinace určitých rostlinných silic působí aditivně nebo synergicky?
4. Metodika
Prvotní screening antimikrobiální aktivity rostlinných silic bude proveden difuzní metodou na agarovém živném mediu (Disc diffusion assay). Nejúčinnější silice budou dále hodnoceny mikrodiluční metodou (Broth microdilution method) v tekutém kultivačním mediu na mikrotitračních destičkách. Na základě spektrofotometrického vyhodnocení růstu bakterií bude stanovena minimální inhibiční koncentrace (MIC). K ověření minimální baktericidní koncentrace budou inokula přenesena na agarové půdy.
5. Využití v praxi
Poznatky z této práce budou sloužit jako zdroj informací pro vývoj alternativního přípravku pro kontrolu tohoto včelího onemocnění.
Seznam doporučené literatury
BAKKALI, F., AVERBECK, S., AVERBECK, D., IDAOMAR, M., 2008. Biological effects of essential oils–a review. Food and chemical toxicology 46, 446–475. doi:10.1016/j.fct.2007.09.106
DE GRAAF, D.C., ALIPPI, A.M., ANTÚNEZ, K., ARONSTEIN, K.A., BUDGE, G., DE KOKER, D., DE SMET, L., DINGMAN, D.W., EVANS, J.D., FOSTER, L.J., 2013. Standard methods for American foulbrood research. Journal of Apicultural Research 52, 1–28. doi:10.3896/IBRA.1.52.1.11
FLESAR, J., HAVLIK, J., KLOUCEK, P., RADA, V., TITERA, D., BEDNAR, M., STROPNICKY, M., KOKOSKA, L., 2010. In vitro growth-inhibitory effect of plant-derived extracts and compounds against Paenibacillus larvae and their acute oral toxicity to adult honey bees. Veterinary microbiology 145, 129–133. doi:10.1016/j.vetmic.2010.03.018
GENERSCH, E., 2010. American Foulbrood in honeybees and its causative agent, Paenibacillus larvae. Journalof invertebrate pathology 103, 10–19. doi:10.1016/j.jip.2009.06.015
TITĚRA, D., 2009. Mor včelího plodu. Výzkumný ústav včelařství v Dole. ISBN 9788087196021.
Seznam doporučené literatury
BAKKALI, F., AVERBECK, S., AVERBECK, D., IDAOMAR, M., 2008. Biological effects of essential oils–a review. Food and chemical toxicology 46, 446–475. doi:10.1016/j.fct.2007.09.106
DE GRAAF, D.C., ALIPPI, A.M., ANTÚNEZ, K., ARONSTEIN, K.A., BUDGE, G., DE KOKER, D., DE SMET, L., DINGMAN, D.W., EVANS, J.D., FOSTER, L.J., 2013. Standard methods for American foulbrood research. Journal of Apicultural Research 52, 1–28. doi:10.3896/IBRA.1.52.1.11
FLESAR, J., HAVLIK, J., KLOUCEK, P., RADA, V., TITERA, D., BEDNAR, M., STROPNICKY, M., KOKOSKA, L., 2010. In vitro growth-inhibitory effect of plant-derived extracts and compounds against Paenibacillus larvae and their acute oral toxicity to adult honey bees. Veterinary microbiology 145, 129–133. doi:10.1016/j.vetmic.2010.03.018
GENERSCH, E., 2010. American Foulbrood in honeybees and its causative agent, Paenibacillus larvae. Journalof invertebrate pathology 103, 10–19. doi:10.1016/j.jip.2009.06.015
TITĚRA, D., 2009. Mor včelího plodu. Výzkumný ústav včelařství v Dole. ISBN 9788087196021.