|
Vyučující
|
-
Doležal Petr, RNDr. Ph.D.
-
Kodrík Dalibor, prof. RNDr. CSc.
-
Košťál Vladimír, prof. Ing. CSc.
-
Okrouhlík Jan, Mgr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
Jedna přednáška bude zahrnovat nezbytný teoretický úvod, zbytek kurzu bude praktické cvičení. Obsah cvičení 1. Izolace a purifikace neurohormonů (Dalibor Kodrík) Izolace adipokinetických hormonů (AKH) z mozku ruměnice pospolné Pyrrhocoris apterus - pitva mozků, extrakce peptidů pomocí metanolu, rozdělení směsi peptidů pomocí HPLC (Waters) za použití kolony C18 reverzní fáze, identifikace a semi-kvantifikace AKH pomocí syntetických standardů AKH. 2. Identifikace peptidických hormonů pomocí ELISA metody (Dalibor Kodrík) Identifikace a kvantifikace adipokinetických hormonů (AKH) v CNS ruměnice pospolné Pyrrhocoris apterus - pitva mozků, extrakce peptidů pomocí metanolu, kvantifikace pomocí kompetitivní ELISA za použití protilátky proti Pyrap-AKH a syntetických standardů AKH. 3. Fázové změny tělní vody hmyzu - podchlazení, mrznutí, vitrifikace (Vladimír Košťál). Odběr vzorku hemolymfy, měření osmolality (Vapro 58520, Wescor). Charakterizace reálného bodu mrznutí a podchlazení (Ministat 240cc, Huber). Stanovení vody volné a vázané, stanovení teploty skelného přechodu (DSC4000, Perkin Elmer). Ovlivnění charakteristik nukleačními bakteriemi a krystaly ledu. 4. Stanovení fázového stavu a fluidity biologických membrán (Vladimír Košťál). Extrakce celkových fosfolipidů z hmyzí tkáně (Folchova metoda a separace pomocí SPE). Stanovení molární koncentrace fosfolipidů (stanovení fosforu molybdátovým činidlem). Příprava "umělých buněk" (fosfolipidických vesiklů, SUV). Měření fluidity SUV pomocí polarizační fluorimetrie (Infinite F200Pro, Tecan). Ovlivnění fluidity změnou složení membrán. 5. Měření metabolismu živočichů (Jan Okrouhlík, Petr Doležal) Stanovení spotřeby kyslíku u larev vodního hmyzu za pomoci chemických a fluorescenčních kyslíkových sond. Stanovení produkce CO2 infračervenou spektrofotometrií v otevřeném i uzavřeném systému (Qubit Systems, Sable Systems, LI-COR Biosciences). Užití dvojitě značené vody (DLW) k měření intenzity metabolismu u obratlovců. 6. Termoregulace a produkce tepla (Jan Okrouhlík, Petr Doležal) Sledování termoregulačních mechanismů zástupců hmyzu a savců v různých životních situacích (ochlazování, zahřívání, práce, hormonální stimulace atd.) za pomoci infračervené kamery.
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
Monologická (výklad, přednáška, instruktáž), Demonstrace, Projekce (statická, dynamická), Laboratorní práce
- Účast na výuce
- 30 hodin za semestr
- Příprava na zkoušku
- 10 hodin za semestr
|
|
Výstupy z učení
|
Seznámit studenty s moderními metodami užívanými v oboru Fyziologie živočichů, zejména se zaměřením na praktickou uplatnitelnost. Modelové organismy jsou zvoleny tak aby kromě samotné metodiky byli studenti seznámeni i s ekologii a hospodářským významem druhu.
Kurz bude zaměřen na zvládnutí široké škály laboratorních metod užívaných ve fyziologii živočichů, jako je HPLC, ELISA, měření osmolarity, práce s diferenčním skenovacím kalorimetrem, měření bodu podchlazení, měření metabolismu, ovládání infračervené kamery atd.
|
|
Předpoklady
|
Speciální kurz doktorského studijního oboru Fyziologie a vývojová biologie. Předpokládají se znalosti na úrovní výstupního minima magisterského programu Fyziologie a vývojová biologie.
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Vypracování laboratorních protokolů, Průběžné hodnocení
Pro vykonání zkoušky je předpokladem účast na alespoň 80 % praktických laboratorních cvičení. Zkouška bude probíhat ústně, přičemž budou diskutovány všechny demonstrované metodiky.
|
|
Doporučená literatura
|
-
Literatura u vedoucích jednotlivých úloh.
|